Фундаментальні дослідження. Лікарські рослини

Син: ісландський лишайник, колючник, сухобірний мох, лопастянка, легеневий мох, кошмар, рябчиковий мох, ісландська лопастянка.

Цетрарія ісландська (ісландський мох) – унікальна цілюща рослина, назва якої не має нічого спільного зі справжніми мохами. Цей лишайник є показник екологічної чистоти місцевості. Застосовується у медицині, народному господарстві, кулінарії.

Поставити запитання експертам

В медицині

Цетрарія ісландська знайшла своє застосування в офіційній та народній медицині. У складі рослини присутня уснінова кислота, яка має сильну антибіотичну активність, тому ісландський мох успішно використовується при лікуванні простудних захворювань, запалення органів черевної порожнини та кишечника. Корисні властивості цетрарії відомі людству з давніх-давен. Ще в ІХ столітті цей лишайник був визнаний офіційною медициною. Друга його назва звучала як «легеневий мох», оскільки доведено його ефект при застудних захворюваннях, кашлі.

Цетрарія показана для лікування виснажених хворих, при анемії, попрілості та опіках, виразках та гастритах. Рослина має потужні антибактерицидні, ранозагоювальні, імуностимулюючі властивості. Тому успішно використовується для загоєння ран, лікування захворювань шкіри, інфекційних недуг від кашлю.

Поживна цінність цетрарії має високі показники: 80% маси становлять вуглеводи, 2% – жири, 3% – білки. Мох легко засвоюється організмом, відсутні витрати енергії для цього процесу. Він показаний для виснажених хворих та після тяжких інфекційних хвороб.

У складі лишайника містяться в'яжучі активні компоненти, крохмаль. З рослини готують колодці та застосовують при діареї. Дубильні речовини ісландського моху сприяють лікуванню організму від отруєння отрутами рослинного походження та важкими металами.

У кулінарії

Деякі народи застосовують лишайники у кулінарії. У складі ісландського моху знайдені пектинові речовини, які мають високу здатність до утворення клейкої маси - желе. Тому рослину застосовують для приготування колодця, киселю. З ісландського моху виходить непогане пиво. Північні жителі подрібнений висушений мох додають у муку і печуть хліб.

В інших областях

У минулому лишайники, у тому числі і цетрарію, використовували як фарбувальну сировину. Сьогодні синтетичні анілінові барвники витіснили кустарне виробництво барвників з цих рослин.

У 20 столітті з ісландського моху, що стелиться, було вироблено клейову високоякісну речовину, що нагадує желатин.

Лишайник росте лише в екологічно чистому середовищі. Ісландський мох є чудовим кормом для оленів та свиней.

Класифікація

Цетрарія ісландська або ісландська мох (лат. Cetraria islandica) належить до роду Cetraria, сімейства Пармелієвих.

Ботанічний опис

Ісландський мох є невеликим гіллястим кущем з листовим талломом (сласлом). Багаторічна рослина відноситься до звичайних лишайників, пофарбована в буро-зелений відтінок з білими плямами. Досягає у висоту зазвичай 12-15 см. Листок складається з плоских, згорнутих у вигляді жолобка лопатей. Цей гіллястий кущ кріпиться до субстрату (ґрунту, кори дерев або старих пнів) ризоидами. Таллом моху буває різного забарвлення: від світло-коричневого до зеленувато-бурого. На нижній частині слані є отвори, які призначені для проникнення повітря. Лопаті по краях трохи загнуті, блискучі.

Розмножується цетрарія спорами. Плодові тіла ісландського моху мають блюдцеподібну форму, вони плоскі або злегка увігнуті, утворюються на кінцях лопатей талому. За сприятливих умов мох добре росте, розмножується. Якщо ж настає посуха, то рослина підсихає, змінює колір свого забарвлення від зеленого до білувато-сріблястого. У такому стані анабіоз може провести до декількох років, після чого при достатньому зволоженні субстрату відроджується знову за кілька годин.

Розповсюдження

Цетрарія ісландська як представник лишайників поширена у всіх регіонах Росії, зустрічається на Кримському півострові, Кавказі, а також Австралії, Азії, Африці. Віддає перевагу кліматичним умовам помірних широт, тундри і лісотундри. Ісландський мох виростає в соснових лісах, прикріплюючись ризоидами до грунту чи корі великих старих пнів, чудово почувається в піщаних незатінених місцях, на болотах і високогір'ях. Добре росте в екологічно чистих умовах, розростається колоніями на добре освітлених територіях.

Регіони розповсюдження на карті Росії.

Заготівля сировини

Ісландський мох заготовляють наприкінці літа чи ранньої осені. Щоб зберегти лікувальні властивості рослини, сировину ретельно просушують і зберігають не більше двох-трьох років. Зібрані руками або за допомогою граблів лишайники очищають від залишків ґрунту, хвої, дрібно ріжуть і висушують у добре вентильованому приміщенні. Бажано щоб прямі промені не потрапляли на слані лишайників, оскільки багато корисних компонентів руйнуються під впливом ультрафіолету. Сировину ще раз перевертають та досушують. Зберігають у мішках, дерев'яних бочках або скляних банках у темному місці за кімнатної температури.

Хімічний склад

У складі рослини виявлено більше 10 корисних мікроелементів: активний компонент ліхенін, ізолихенін, цукру, віск, камедь, марганець, залізо, йод, мідь, титан, пігменти, лишайникові кислоти (уснінова, ліхестеринова, протолихестеринова). Наявність кислот надають рослині гіркоти, а також зумовлюють її антисептичні та тонізуючі властивості. Багатий склад мікроелементів, наявність полісахаридів сприяють зміцненню захисних сил людини.

Фармакологічні властивості

Препарати з ісландського моху мають імунномоделюючий, протизапальний ефект, мають антимікробну, антиоксидантну, абсорбуючу, онкопротекторну дію на організм людини. Слизова речовина усуває подразнення, обволікає запалені шлунки, ротової порожнини, гортані, кишечника.

Натрієва сіль уснінової кислоти, яка має антибактеріальну властивість, успішно використовується у складі препаратів цетрарії. Ліхестеринова, а також протолихестеринова кислоти особливо активні щодо стрептококів, стафілококів та інших стійких мікробів. Уснінат натрію використовується зовнішньо при терапії трофічних виразок, інфікованих ран, опіків.

Завдяки унікальному складу ісландський мох вважається природним антибіотиком, сила якого нерідко переважає над звичайними антибіотиками. На хвороботворні бактерії, віруси та грибки ефективно впливають кислоти лишайника, зокрема уснінова.

Групою німецьких фармацевтичних компаній розроблено препарати на основі моху ісландського: Ісла-Моос та Ісла-Мінт, Бронхікал плюс для дітей, Bronchialtee 400, Salus Bronchial-Tee №8, присутні на ринку вже багато років. Це говорить про їхню затребуваність і про унікальність складових компонентів лишайника. Дані ліки успішно виліковують хвороби верхніх дихальних шляхів, показані при сухому кашлі, що гавкає, при патологічних станах від ларингіту до астми, при осиплісті голосу і його повній втраті. Активні компоненти препаратів не тільки лікують, а й чудово захищають, попереджають розвиток різноманітних застудних інфекцій у холодну пору року.

Вживання цетрарії у формі лікарських засобів сприятливо впливає на роботу кишечника, шлунка, активізуючи його секреторну функцію і тим самим підвищуючи апетит.

Біологічно активні речовини цетрарії мають протизапальну, пом'якшувальну та відхаркувальну дію.
Полісахариди ісландського моху мають здатність захищати слизову оболонку дихальних шляхів від впливу різних хімічних факторів.
Встановлено, що окремі лишайникові кислоти виявляють виражену протимікробну активність. Особливо цінна уснінова кислота, що має сильну антибіотичну активність. Її натрієва сіль пригнічує зростання мікобактерій туберкульозу та інших грампозитивних мікроорганізмів (стафілококів, стрептококів). За антибактеріальною активністю уснінова кислота приблизно в 3 рази поступається стрептоміцином. Встановлено, що лишайникові екстракти діють переважно на грампозитивні кислотостійкі бактерії. І лише деякі, як виняток - на окремі грамнегативні види. У процесі вивчення технології лікарських засобів, які виготовляються із цетрарії, було встановлено, що при виготовленні відвару у воду переходить лише цетрарова кислота, а уснінова кислота – ні.
Уснінова кислота в невеликих дозах має здатність вбивати збудників туберкульозу та деякі інші грампозитивні бактерії.
Велике значення має і фумарпротоцентрарова кислота, яку вважають одним із найактивніших протимікробних факторів цетрарії. Крім вищезгаданого, німецькі вчені вважають протоцетрарову кислоту, виділену з водної витяжки цетрарії, сильним імуномодулятором, що сприяє активізації імунної системи.
У вільному стані та у вигляді солей D-протолихестеринова кислота активна проти Helicobacter pylori. Очевидно, з цією дією хоча б частково пов'язана терапевтична ефективність ісландського моху при виразковій хворобі шлунка та дванадцятипалої кишки.

Застосування у народній медицині

Лишайник вже багато століть застосовується у народній медицині. Цілющі відвари та настої використовують при туберкульозі, астмі, кашлі, хронічних запорах, спазмах у кишечнику та шлунку. Мох застосовують при запаленні мигдаликів, бронхіті, кашлюку, пневмонії, для зняття зубного болю. Екстракти цетрарії на спирті або олії особливо ефективні при гнійних ранах, опіках та виразках.

Ісландському моху властиві протизапальні, протимікробні, кровоспинні та легкі седативні властивості. Цетрарія відзначена як тонізуючий, імуномодулюючий, загальнозміцнюючий засіб. У деяких країнах Європи лишайник використовується для виробництва ліків проти ВІЛ-інфекції. Японські дослідники виявили особливі властивості моху, які виліковують онкологічні захворювання та різні інфекції.

Історична довідка

Латинська назва ісландського моху походить від слова cetra у перекладі «щит». Перша письмова згадка про застосування ісландського моху як лікарської сировини з'явилася XVII столітті. Друга половина XVIII і перша половина ХІХ століття були періодом найбільш широкого застосування ісландського моху як лікувального засобу. Серед усіх відомих лишайників деякі тодішні автори особливо високо цінували ісландську цетрарію. Зокрема, в 1809 Луйкен писав, що цей мох знаходиться на першому місці серед ліків. Вказуючи на можливості лікувального застосування цетрарії, у тому числі і при туберкульозі, Луйкен зазначав, що за антисептичний ефект ліки з цетрарією виділяються серед усіх відомих на той час ліків. У XVIII і XIX століттях цетрарія була добре відомим традиційним засобом при лікуванні туберкульозу легень, а її слоїва входила до більшості європейських фармакопей тих часів.
Наприкінці XIX і на початку XX століття у зв'язку з інтенсивним розвитком науково-практичної медицини лікарі рідше стали застосовувати лікарські засоби з цетрарією.
У 1919 році А. А. Єленкін та В. Є. Тищенко написали першу наукову монографію «Ісландський мох та інші корисні лишайники російської флори». Книга була друкована у видавництво Петроградського відділення Російського харчового науково-технічного інституту. Однак ця книга у зв'язку з ліквідацією зазначеного інституту не побачила світ. У тому ж році В. Н. Любименко на основі вищевказаного рукопису опублікував статтю «Ісландський мох як харчовий засіб», а пізніше А. А. Єленкін у монографії «Лишайники як об'єкт педагогіки та наукового дослідження» торкнувся проблем практичного застосування цетрарії ісландської у харчовій промисловості. . У період інтервенції та громадянської війни в СРСР у 20-х роках, які зумовили голод в окремих регіонах країни, народи російської півночі використовували слоевище ісландського моху як додатковий харчовий продукт. Видаляючи за допомогою соди або лугу гіркі речовини з цетрарії та висушуючи очищену слоєвище, підмішували її в борошно та випікали хліб. Серед багатьох жителів півночі цетрарія була відома під назвою хлібний мох. У медичних джерелах минулих років цетрарія згадується як ефективний засіб проти слизу з каналу кишечника, для лікування сечового міхура, нирок, при затяжному проносі.

Література

1. Життя рослин. У 6-ти т. т. 3. Водорості та лишайники / За ред. А. Л. Тахтаджяна. - М.: Просвітництво, 1981

2. Лікарські рослини та їх застосування. - 5-е вид., Перероб. в. дод. - М., Наука та техніка, 1974.

1 Інститут екологічних проблем Півночі Уральського відділення Російської академії наук

2 Північний Арктичний федеральний університет ім. М.В. Ломоносова

3 Інститут екологічних проблем Півночі Уральського відділення Російської академії наук, Північний Арктичний федеральний університет ім. М.В. Ломоносова

Значний інтерес до біологічно активних речовин рослинного походження пояснюється широким спектром фармакологічної активності біоактивних речовин. Серед них особливе місце займає уснінова кислота, яка має високі протимікробні, антиоксидантні, протипухлинні, а також імуностимулюючі властивості. У цій статті проведено порівняльний аналіз методів вилучення уснінової кислоти з лишайника роду Cladonia stellaris. Розглянуто традиційні методи екстракції (мацерація, перколяція), їх модифікації (використання техніки надвисокочастотного випромінювання) та сучасні (застосування суб- та надкритичних розчинників), відзначені їх переваги та недоліки. Показано, що високоефективним є метод надкритичної флюїдної екстракції діоксидом вуглецю, що дозволяє з високим виходом отримати уснінову кислоту (до 2,39% від маси а.с. лишайникової сировини), при цьому екстракт містить 90-100% уснінової кислоти.

лишайники

методи екстракції

уснінова кислота

1. Кершенгольц Б.М., Ремігайло П.А., Шеїн А.А., Кершенгольц Є.Б. // Далекосхідний медичний журнал. - 2004. - № 1. - С. 25-29.

2. Коптелова Є.М., Кутакова Н.А., Третьяков С.І. Вилучення екстрактивних речовин та бетуліну з берести при дії НВЧ-поля // Хімія рослинної сировини. - 2013. - № 4. - С. 159-164.

3. Моїсеєва Є.М. Біохімічні властивості лишайників та його практичне значення. - М: Вид. АН СРСР, 1961. - 82 с.

4. Пічугін А.А., Тарасов В.В. Суперкритична екстракція та перспективи створення нових безстічних процесів // Успіхи хімії. - 1991. - Т. 60. - С. 2412-2421.

5. Подтероб А.П. Хімічний склад лишайників та його медичне застосування // Хіміко-фармацевтичний журнал. – 2008. – Т. 42. – № 10. – С. 32–38.

6. Соколов Д.М., Лузіна О.А., Салахутдінов Н.Ф. Уснінова кислота: отримання, будова, властивості та хімічні перетворення // Успіхи хімії. – 2012. – Т 81. – № 8. – С. 747–768.

7. Manojlovic N.T., Vasiljevic P.J., Maskovic P.Z., Juskovic M., Bogdanovic-Dusanovic G. // Evid Based Complement Altrnat Med. – 2012. – № 1. – С. 1–8.

Для кожного виду лишайника характерна наявність певних лишайникових кислот (наприклад, уснінова, протолихестеринова, ліхестеринова кислоти характерні для лишайників роду Сladonia), що є їхньою систематичною ознакою. Уснінова кислота (УК) – жовта кристалічна речовина, що за структурою відноситься до дибензофуранів, має високу активність по відношенню до багатьох патогенних організмів вірусної, бактеріальної та грибкової природи і має антиоксидантні, протипухлинні, імуностимулюючі та гепатопротекторні властивості. що дозволяє успішно використовувати її при лікуванні захворювань різної етіології. Завдяки таким властивостям застосовується у фармакології, косметиці, стоматології та інших галузях медицини. Однак, незважаючи на позитивний досвід використання КК у багатьох розділах клінічної медицини, виробництво лікарських засобів на її основі не налагоджено. Ймовірно, відомі методи виділення біоактивних речовин із лишайникової сировини не дають бажаних результатів. Відомо близько 70 видів лишайників, що містять уснінову кислоту. Однак промислове значення можуть мати лише ті з них, у яких кількість цієї кислоти становить щонайменше 0,5 %. Перспективним джерелом уснінової кислоти є рід лишайника Cladonia, в якому ця сполука є основним метаболітом.

Класичними методами виділення біологічно активних сполук із рослинної сировини є екстракційні із застосуванням органічних розчинників. До них відносяться мацерація (наполягання), перколяція (безперервна фільтрація екстрагента крізь шар сировини), реперколяція. Для виділення лишайникових кислот використовують різні органічні розчинники: бензол, ацетон, гексан, етанол, петролейний ефір, хлороформ або їх суміші збільшення виходу цільового продукту . Перевагою цих способів є простота виконання та обладнання. До недоліків відносяться тривалість процесу екстракції, підвищений вміст домішок в екстрактах, трудомісткість, використання значних обсягів розчинників, часто висока токсичність і леткість органічних розчинників, що застосовуються. Однак, незважаючи на зазначені недоліки, ці методи знаходять своє застосування в даний час, але частіше в модифікованому вигляді. До таких способів можна віднести екстракцію з використанням техніки надвисокочастотного випромінювання (НВЧ).

Поряд з вищепереліченими традиційними методами екстракції в даний час використовують сучасні способи екстрагування, такі як надкритична флюїдна екстракція (СКФЕ), екстракція субкритичними розчинниками, прискорена екстракція рідкими розчинниками (ASE), які дозволяють виділяти продукти екстракції з рослинної сировини, не приводячи до їх максимально зберігаючи біологічну цінність всіх компонентів. У зв'язку з цим численні дослідження, що проводяться в Росії та за кордоном, присвячені розробці нових способів вилучення біологічно активних речовин із природних матриць та дослідженню їх властивостей інтенсивно розширюються.

Метою даної роботи було порівняльне вивчення можливості виділення уснінової кислоти з лишайникової сировини традиційними методами та методами з використанням сучасних технологій.

Об'єктами цього дослідження були слані лишайників роду Cladonia stellaris, які ростуть на субарктичній території РФ. Зразки лишайників зібрали на острові Російський Кузов, Біле море.

Повітряно-суха лишайникова сировина, попередньо очищена від механічних домішок, подрібнювали на лабораторному млині ЛН-201. Елементний аналіз сировини проводили на елементному аналізаторі EvroEA 3000 (конфігурація). Зразок лишайника містить 429 ± 17; 6,68±0,27; 1,19 ± 0,05 % С, Н і N відповідно, вологість – 6,68 %, зольність – 0,73 %. Для оцінки біобезпеки сировини визначали вміст низки токсичних (зокрема важких металів), і навіть біогенних елементів. Аналіз виконаний на послідовному хвилодисперсійному рентгенофлуоресцентному спектрометрі XRF-1800. Елементний склад золи лишайника характеризується переважним вмістом біогенних елементів: калію (27,17%), магнію (5,59%) та фосфору (7,85%). Інші елементи (включаючи деякі важкі метали) такі як S, Cl, Ti, Mn, Cr, Sr, Br, Cu, Rb, Ni, Pb, присутні в кількості менше 1%, що не істотно впливає на життєдіяльність лишайника і виділення з нього БАВ.

Виділення лишайникових кислот проводили різними методами:

- Екстракцією органічними розчинниками методом наполягання;

- Екстракцією органічними розчинниками на апараті Сокслета;

- Екстракцією з використанням техніки НВЧ;

– прискореною екстракцією рідкими розчинниками;

– надкритичною флюїдною екстракцією діоксидом вуглецю;

- Екстракцією субкритичним діоксидом вуглецю.

Усниновую кислоту ідентифікували методом ВЕРХ. Хроматографічне поділ проводили на приладі LC-30 Neexera (Shimadzu, Японія). Детектування проводили з використанням спектрофотометричного детектора діодна матриця при довжині хвилі 280 нм. Зразки розчиняли в ацетоні, фільтрували та вводили в хроматографічну систему. З використанням стандартного зразка КК фірми Aldrich були побудовані калібрувальна залежність площі піку від концентрації в діапазоні від 1 мкг/л до 0,1 мг/л. Залежність лінійна з коефіцієнтом кореляції понад 0,99.

Екстракція органічними розчинниками методом наполягання

Мацерація є звичайне вимочування в розчиннику, при якому відбувається розпушування клітинних стінок рослинної сировини і розчинення екстрагованих речовин. Наважку лишайника близько 5 г поміщали в колбу з етиловим спиртом. Настоювання проводили у сушильній шафі при температурі 70 °С протягом 30 хвилин. Зміст КК в екстракті становило 24%, а вихід КК маси а.с. лишайникової сировини – 0,27%. Для підвищення виходу КК даним методом тривалість процесу екстракції необхідно значно збільшити.

Екстракція органічними розчинниками на апараті Сокслета

При перколяції розчинник проходить (просочується) через шар подрібненої сировини та «вимиває» цільові компоненти. Патрон з навішуванням близько 5 г лишайника поміщали в апарат Сокслета. Як екстрагент використовували ацетон, етанол або хлороформ (марка хч), тривалість перколяції - 30-60 хв (таблиця).

Вихід КК при екстракції різними розчинниками на апараті Сокслета

Незважаючи на простоту, традиційна екстракція не дозволяє отримати КК з високим виходом простим екстрагування, т.к. рослинна клітина лишайника при даному методі екстракції залишається цілою і непроникною, крім того використання токсичних та пожежонебезпечних органічних розчинників роблять цю технологію небезпечною.

Екстракція з використанням техніки НВЧ

Для інтенсифікації процесу отримання БАВ використовують вплив на сировину різних силових полів. Одним з ефективних способів екстракції рослинних матеріалів є мікрохвильова обробка в надвисокочастотному полі. Технологічні параметри процесу вилучення БАВ у НВЧ-полі: питома потужність 350 Вт/год; рідинний модуль 1/15; екстрагент - етиловий спирт. Тривалість екстракції варіювали від 5 до 20 хв. Характер впливу НВЧ-поля схожий з інтенсивною вологотепловою обробкою, що проводиться шляхом поєднання обробки гострим парою і кондуктивного нагріву, але руйнування структури при впливі НВЧ-поля відбувається більшою мірою, що дозволяє інтенсифікувати просочення пор рослинної сировини рідким екстрагентом і, відповідно, суттєво прискорити процес екстракції. При екстракції етанолом протягом 10 хвилин вихід КК досягає максимального значення 1,36 % від маси а.с. лишайникової сировини (рис. 1), при цьому підвищується чистота цільового продукту (зміст КК в екстракті, становило 30%).

Мал. 1. Вплив НВЧ-обробки на вихід КК (% від маси а.с. сировини) при варіюванні тривалості екстракції

Використання техніки НВЧ для вилучення КК дозволило скоротити тривалість екстракції до 10 хв порівняно з традиційними методами вилучення БАВ, при цьому вихід і чистота цільового продукту значно збільшуються.

Метод прискореної екстракції рідкими розчинниками

Метод прискореної екстракції розчинниками – це відносно нова технологія, в якій використовуються підвищені температура та тиск з метою збільшення швидкості та ступеня вилучення цільових компонентів із зразків із різною матрицею. Екстракцію виконано на приладі ASE 350, Dionex США. У комірку об'ємом 10 мл завадили навішування подрібненого лишайника масою 1 г, змішану з 1 г діатомітової землі. Екстракцію проводили при температурах 80, 100, 150 °З тиску 100 атм. Параметри екстракції: розчинники різної природи та полярності (вода, ацетон, етанол), 5 хв нагрівання осередку, 5 хв витримування зразка при заданій температурі, об'єм екстрагента 10 мл.

Показано, що вода є поганим розчинником уснінової кислоти, вихід уснінової кислоти не перевищує 0,08% (рис. 2).

Використання екстрагенту етанолу та ацетону (субкритичні умови) показує порівняні результати, і вихід КК досягає 2,77–2,82 %, при цьому вміст КК в екстракті становив 20–30 %. Зі збільшенням температури екстракції вихід КК збільшується. При екстракції методом ASE скорочується тривалість процесу до кількох хвилин, значно прискорюється пробопідготовка та для його виконання потрібні невеликі кількості розчинника. Таким чином, ASE є перспективним методом виділення лишайникових кислот, зокрема КК, а варіювання параметрів процесу дозволяє значно збільшити вихід цільового компонента

Мал. 2. Вихід КК (% від маси а.с. сировини) в екстракті, отриманому методом ASE

Метод надкритичної флюїдної екстракції

Надкритична флюїдна екстракція виконана з використанням установки MV-10ASFE (Waters, США). Як екстрагент використовували надкритичний діоксид вуглецю. Процес СКФЕ був виконаний у динамічному режимі, широкому інтервалі температур (40-80 ° С) та тиску (10-35 МПа). Тривалість екстракції 20 хв. Екстракт після декомпресії розчиняли в потоці домивающего розчинника (ацетон, швидкість подачі 2 мл/хв). Використання домивающего розчинника запобігає винесення твердих компонентів екстракту з потоком газоподібного діоксиду вуглецю. Надкритичний діоксид вуглецю – стабільна та інертна речовина, що виявляє хімічну індиферентність по відношенню до сировини, що переробляється, та видобутих речовин. Також його перевагами є невисока вартість та можливість багаторазового використання. Застосування діоксиду вуглецю замість органічних розчинників підвищує екологічну безпеку виробництва, а також ступінь чистоти одержуваних продуктів.

Збільшення температури з 40 до 80 ° С призводить до підвищення ефективності екстракції, при цьому вміст сухих речовин у виділеному екстракті зростає з 1 до 2% маси а.с. сировини, взятої на аналіз. Збільшення тиску від 10 до 35 МПа призводить до зростання виходу цільового продукту вдвічі (рис. 3).

Екстракт, що отримується з використанням СО2 у надкритичному стані, містить 90–100 % уснінової кислоти та характеризується її високим виходом щодо сировини – 0,52–2,39 %. Крім того, отримання екстрактів за допомогою надкритичного СО2 вигідно економічно, так як цей спосіб дає можливість виробляти досить концентровані (або у твердому вигляді) екстракти уснинової кислоти високої чистоти.

Екстракція із застосуванням субкритичного СО2

Екстракт лишайникових кислот може бути отриманий також і при використанні як екстрагент субкритичного СО2 (тиск 7 МПа, температура 20 °С, швидкість подачі СО2 0,1 кг/год, витрата СО2 100 кг/кг сировини). Вихід екстракту 0,52% від а.с. сировини, екстракт містить 85% уснінової кислоти та характеризується високим виходом КК щодо сировини – 1,02%. Крім того, м'якіші умови (у порівнянні зі СКФЕ) виключають ізомеризаційні процеси в ході екстракції, що сприяє збереженню біологічної активності виділених БАВ. Також перевагою використання субкритичного СО2 як екстрагент є зниження енергетичних витрат на підвищення тиску і нагрівання СО2.

Мал. 3. Вплив тиску та температури СКФЕ на вихід КК (% від а.с. сировини)

Таким чином, результати кількісного вилучення уснінової кислоти різними методами показали, що традиційні методи (мацерація, перколяція) малоефективні та трудомісткі, а отримані екстракти містять велику кількість побічних продуктів. Нові технології (екстракція надкритичними та субкритичними розчинниками, метод ASE) дозволяють значно збільшити вихід та покращити якість цільового продукту. Наші дослідження показали доцільність використання методики надкритичної флюїдної екстракції, що дозволяє витягти уснінову кислоту у вигляді твердого екстракту в одну технологічну стадію, при цьому вміст уснінової кислоти в екстракті становить 90-100%.

Дослідження виконано за фінансової підтримки ФАНО Росії у рамках теми (проекту) № 0410-2014-0029 «Фізико-хімічні основи вивчення основних закономірностей фундаментального циклу «будова – функціональна природа – властивості» природних полімерних матриць», а також у рамках наукового проекту комплексної програми Уральського відділення РАН № 0410-2015-0021 «Нові підходи до комплексної оцінки стану та еволюції лісових та болотних екосистем західного сегмента Арктики» з використанням обладнання ЦКП ПЗ «Арктика» (САФУ) за фінансової підтримки Мінобрнауки РФ (Унікальний ідентифікація4 ЦКП КТ РФ-Арктика (ІЕПС, ІФПА УРО РАН).

Рецензенти:

Поскотінова Л.В., д.б.н., доцент, зав. лабораторією біоритмології, ФДБУ «Інститут природних адаптацій» УРО РАН, м. Архангельськ;

Хабаров Ю.Г., д.х.н., професор кафедри технології ЦБП, ФДАОУ ВПО «Північний (Арктичний) федеральний університет ім. М.В. Ломоносова», м. Архангельськ.

Лишайники добре відомі різноманітністю вторинних метаболітів, так званими лишайниковими речовинами. Мабуть, найбільш відомим вторинним метаболітом лишайників є уснінова кислота, яка продукується під час пологів. Cladonia, Usnea, Lecanora, Ramalina, Evernia, Parmelia, Alectoriaта в інших родах лишайників. Уснінова кислота має противірусну, антибіотичну, аналгетичну, протитуберкульозну та інсектицидну активності.

Уснінова кислота продукується мікобіонтом лишайника, - це було вперше показано в роботі і надалі уснінову кислоту витягли із ізольованих мікобіонтів лишайників роду Ramalina. Уснінова кислота вперше була виділена в 1843 р. з лишайників пологів Ramalinaі Usnea, роком пізніше характеризується як індивідуальна речовина та отримала свою назву. Через дев'ять десятиліть було встановлено її хімічну будову.

Уснінова кислота продукується в лишайниках у великих кількостях, становлячи до 8% від сухої ваги таломів. Спостерігаються великі сезонні коливання вмісту уснінової кислоти в таломах лишайників: піковий рівень наприкінці весни та на початку літа, і загалом низький рівень протягом осені та зими. Вміст уснінової кислоти корелює з часом настання літнього сонцестояння, рівнями сонячної радіації та температурними умовами, залежить від місця зростання лишайника.

Уснінова кислота - кристалічна речовина жовтого кольору, за своєю будовою відноситься до похідних дибензофурану і існує у вигляді двох енантіомерних форм, що відрізняються конфігурацією метильної групи у атома С 9b. Правообертальний енантіомер має R-конфігурацію ангулярної метильної групи та її питоме обертання становить +478 (з 0.2 CHCl 3 (град мл) (г дм) -1). Типовим продуцентом (+)-уснінової кислоти є Usnea longissima, джерелом лівообертаючого енантіомера уснінової кислоти можна назвати Cladonia stellaris(-458, c 0.2 CHCl 3 (град мл) (г дм) -1).

Гідроксильні групи уснінової кислоти беруть участь в утворенні сильних міжмолекулярних водневих зв'язків. Константи дисоціації гідроксильних груп уснінової кислоти, визначені спектрофотометричним титруванням, складають: pKa 1 4.4 (C 3 -OH), pKa 2 8.8 (C 7 -OH), pKa 3 10.7 (C 9 -OH). Кислотність середовища проживання і співвідношення нейтральної і аніонної форм усниновой кислоти, припущення дослідників, грають значної ролі у життєдіяльності лишайника.

Гідроксильні групи цієї молекули утворюють сильні внутрішньомолекулярні водневі зв'язки, а також здатні формувати міжмолекулярні водневі зв'язки, що може сприяти швидкій передачі надлишкової енергії, отриманої лишайниками від Сонця, довкілля у вигляді тепла.

Наявність резорцинового циклу та системи сполучених карбонільних груп сприяють тому, що молекула уснінової кислоти широко поглинає в ближньому УФ (320-400 нм), середньому УФ (280-320 нм) та далекому УФ (нижче 280 нм) діапазонах. Слід зазначити, що цей метаболіт виступає як ефективний сонцезахисний засіб для лишайників. Це дозволяє лишайникам, наприклад, за умови тривалого перебування на сонці у спекотних пустелях знизити шкідливий вплив сонячного випромінювання.

Основним способом отримання уснинової кислоти, починаючи з перших досліджень XIX і до наших днів, є екстрагування лишайників органічними розчинниками і подальші осадження з екстракту або його перекристалізація. Уснінова кислота добре розчиняється в бензолі, хлороформі, аміловому спирті, крижаній оцтовій кислоті, малорозчинна в етанолі, петролейному ефірі, діетиловому ефірі і нерозчинна у воді.

Сторінка 3

Біосинтез дидимової кислоти, як і деяких інших поліциклічних лишайникових речовин (зокрема, що розглядаються в цьому розділі уснінової кислоти і стрепсиліну), ймовірно, здійснюється шляхом конденсації ацетильних залишків з утворенням відповідних фенольних сполук521, які потім піддаються окислювальної димеризації і подальшого окислення.

Слід, втім, зауважити, що препарат, отриманий з лишайника Evernia i - irunastri і містить поряд з усніновою кислотою (про неї див. стор.

Перейдемо до розгляду тих експериментальних даних, які привели до висновку, що формула (333) правильно відображає будову молекули уснінової кислоти.

У той же час, виходячи з формул (333) чи (349), можна цілком задовільно пояснити всі досі відомі властивості та перетворення уснінової кислоти, що і змушує визнати ці формули правильними.

Однак найбільш інтенсивно ці дослідження стали розвиватися лише в період 1930 - 1940 рр., коли з'явилося дуже значне число повідомлень 1409 ms-i - ьь присвячених як самої уснінової кислоти, так і ряду продуктів її розщеплення.

Цікаво, однак, що антибіотичні властивості уснінової кислоти не залежать від просторової будови її молекули: () -, (-) - і () - уснінові кислоти мають практично однакову активність. Її вилучають за допомогою Et2O і після відокремлення від інших лишайникових речовин очищають кристалізацією з петролейного ефіру.

Уснінова кислота (333) та її діацетильна похідна (350) титруються як одноосновні кислоти, хоча вони і не містять карбоксильної групи. Уснінова кислота володіє трьома активними атомами водню, незважаючи на наявність лише двох фенольних гідроксилів. Звідси випливає, що її ациклічна угруповання містить енольний гідроксил, що має сильно кислі властивості.

Незважаючи на те, що уснінова кислота вперше була виділена в 1843 р. з Ramilina fraxinea і L/snea borbata, хімічна будова її протягом майже цілого століття залишалася невідомою. Будівлі уснінової кислоти були присвячені численні роботи; однак ясність щодо головних структурних особливостей цього з'єднання та продуктів його перетворення була внесена в результаті пізніших досліджень, які провели Робертсон, Асахіна та Шепф та їх співробітники.

За допомогою цієї формули можна пояснити поведінку уснінової кислоти як 1 3-дикетону по відношенню до реагентів, що дає характерні реакції з карбонільною групою. Формула XIX дозволяє пояснити поведінку уснінової кислоти при титруванні та при визначенні активного водню за методом Чугаєва – Церевітінова. З цієї структури легко пояснити утворення продуктів гідролітичного розщеплення усниновой кислоти.

Листок у неї має вигляд прямостоячих або розпростертих кущиків, кінцеві гілочки завжди синювато-чорні. Вона містить у великій кількості уснінову кислоту (до 8%), її особливо охоче поїдають північні олені.

Будова більшості О-гетероциклічних антибіотиків в даний час встановлена ​​повністю, а багато з них отримані синтетично. Хімічне вивчення таких антибіотиків, як патулін, уснінова кислота, гризеофульвін, геодин, цитринін і сезамін, зажадало значних зусиль і формули, що пропонувалися для них, неодноразово доводилося переглядати. Як характерний приклад можна навести уснінову кислоту, встановлення будови якої зажадало більш ніж шістдесятирічних досліджень, а її синтез було здійснено ще на 15 років пізніше. З іншого боку, останнім часом було приділено незаслужено багато уваги вивченню досить звичайних перетворень, наприклад такого порівняно простого з'єднання.

Завдяки високій антибіотичній дії ряду лишайників (їх екстрактів) речовини, що містяться в лишайниках, заслуговують на особливу увагу. Біологічна активність пояснюється насамперед наявністю d - уснінової кислоти, що зустрічається у видах уснеа, еверніа, летарія та пар-меліа. З лишайників виділено також близько 70 інших сполук, які можна віднести до депсидів, депсидонів, дибензофуранів та лактонових кислот. Для ідентифікації має сенс поряд з кислотами, виділеними з лишайників, аналізувати хроматографічно і продукти їх гідролізу.

Винахід відноситься до галузі фармацевтики і стосується інгібіторів репродукції вірусу грипу (штам A/California/07/09 (H1N1)v), що являють собою (R)-уснинову кислоту (1) і окислене

похідне (S)-уснінової кислоти (2):

Інгібітори мають високу інгібуючу активність. 4 ін., 1 табл.

Винахід відноситься до медицини та фармацевтики, безпосередньо до біологічно активних речовин, які можуть використовуватися як інгібітори репродукції вірусу грипу.

Грип є широко поширеною в усьому світі респіраторною інфекцією. Він викликає щорічні епідемії, які швидко поширюються з країни в країну, залучаючи у важких випадках (пандемії) значну частину людської популяції земної кулі. Він також є причиною 20000-40000 смертельних випадків у США на рік. Незважаючи на успіхи, досягнуті в галузі хіміотерапії, вакцинопрофілактики та імунології грипу, він залишається важко контрольованою інфекцією внаслідок високої генетичної мінливості та різних довготривалих ускладнень після гострої стадії, що призводять до "прихованої", або вторинної смертності, спричиненої не самим вірусом грипу, але вірус вторинними процесами.

Вакцинація проти грипу є ефективним протиепідемічним засобом, проте внаслідок постійної зміни антигенних властивостей збудника потрібен постійний моніторинг та розробка нових вакцинних штамів, що відповідають циркулюючою в людській популяції в кожний конкретний епідемічний сезон.

Хіміопрофілактика та хіміотерапія грипу застосовуються поряд з вакцинацією для запобігання та лікування захворювання. В даний час для цих цілей доступний широкий спектр патогенетичних, імуномодулюючих, загальнозміцнювальних препаратів поряд із засобами специфічної протигрипозної терапії. Останні препарати представлені хімічними сполуками двох груп, що відрізняються за механізмом дії та мішеням у життєвому циклі вірусу грипу. Препарати першої групи - римантадин (-метил-1-адамантилметиламіну гідрохлорид) і амантадин (1-аміноадамантан) - блокують білок М2 вірусу грипу, що грає роль іонного каналу у вірусній мембрані, перешкоджаючи тим самим процесу розщеплення гемаглютиніну та злиття мембраном вірусу. Препарати другої групи спрямовані на пригнічення вірусної нейрамінідази - ферменту, необхідного для нормального брунькування вірусних частинок та прояву інфекційних властивостей вірусу грипу. До цієї групи сполук відносяться занамівір (5-(ацетиламіно)-4-[(аміноімінометил)-аміно]-2,6-ангідро-3,4,5-тридезокси-D-гліцеро-D-галактонон-2-енонова кислота) , озелтамівір ((3R,4R,5S)-етил-4-ацетамідо-5-аміно-3-(пентан-3-ілокси)циклогекс-1-енкарбоксилат) і перемівір ((1S,2S,3S,4R)-3 -[(1S)-1-ацетамідо-2-етил-бутил]-4-(діамінометиліденаміно)-2-гідрокси-циклопентан-1-карбонова кислота) . Обидві групи з'єднань мають недоліки. Щодо групи похідних адамантану можна відзначити порівняно високу токсичність, вузький спектр дії (препарати активні проти грипу А, але не проти грипу В) та швидке формування стійкості вірусу до препаратів. Для інгібіторів нейрамінідази характерна дещо менша клінічна ефективність та висока вартість синтезу, що робить ці препарати менш доступними для широкого використання. Все сказане вище свідчить про необхідність пошуку та розробки ефективних і дешевих протигрипозних препаратів можливо ширшого спектра дії.

Ще одним препаратом, який іноді використовується при терапії грипу, є рибавірин. Як аналог нуклеозидів, рибавірин ефективний у субтоксичних концентраціях, і системне його застосування викликає побічні реакції, зокрема, анемію та тератогенний ефект при вживанні під час вагітності. Переважно рибавірин у комбінації з інтерфероном застосовується при лікуванні гепатиту, проте його ефект показаний при місцевому (інгаляційному) застосуванні у разі РС-вірусної та ранніх стадій грипозної інфекції.

Тим не менш, при появі випадків захворювання людини на атипову пневмонію (SARS), а пізніше - грип птахів підтипу H5N1 рибавірин використовувався внутрішньовенно при терапії тяжких випадків захворювання. Після використання рибавірину були відмічені випадки полегшення хвороби та повного одужання пацієнтів.

Рибавірин є препаратом комплексного механізму дії. Він впливає на реплікацію вірусу грипу двома шляхами - прямо, втручаючись в полімеразні процеси при транскрипції та реплікації вірусного геному, і опосередковано - пригнічуючи клітинний фермент інозинмонофосфатдегідрогеназу і виснажуючи тим самим клітинний пул ГТФ, необхідного для побудови. Оскільки головна мета препарату не вірусний, а клітинний фермент, то стійкі до рибавірину штами вірусу грипу відзначаються дуже рідко або виявляються взагалі. У той же час суттєві побічні ефекти та невисока активність дозволяють рекомендувати його тільки при тяжких станах хворих на грип (De Clercq E. // Nat Rev Dmg Discov. 2006; 5:1015-25; Beigel J, Bray M. // Antiviral Research 2008 78:91-102).

Завданням винаходу є розширення асортименту інгібіторів репродукції вірусу грипу.

Завдання вирішується застосуванням (R)-уснінової кислоти формули 1 і окисленого похідного (S)-уснінової кислоти формули 2:

як інгібітори репродукції вірусу грипу.

Уснінова кислота є унікальним і доступним вітчизняним рослинним метаболітом. З лишайників різних видів у достатній кількості виділяється оптично активна уснінова кислота з протилежними за знаком кутами обертання і високою оптичною чистотою. Обидва енантіомери мають цілий спектр біоактивних властивостей. Найбільш широко вивчені антибактеріальні, інсектицидні та фунгіцидні властивості уснінової кислоти, але відомі також дані про її противірусну активність. Так, комерційно доступна (S)-уснінова кислота інгібує цитопатичний ефект вірусу герпесу 1 типу. Комплексний препарат Zn-уснінова кислота тестувався проти папіломавірусу та виявив ефект запобігання розмноженню вірусу в період до 6 місяців після терапії. (S)-Уснінова кислота в концентраціях 1.0 µg/ml виявила інгібуючий ефект щодо реплікації вірусу Епштейна-Барра, при цьому (R)-уснінова кислота виявилася менш активною, її ефективна концентрація склала 5.0 µg/ml. Біологічна активність уснінової кислоти та її похідних щодо вірусу грипу не описана у літературі.

(R)-Уснинову кислоту 1 виділяли з лишайника Cladonia stellaris, (S)-уснінову кислоту 3 із суміші лишайників роду Usnea за методикою [Н.Ф.Салахутдінов, М.П.Половинка, М.Ю.Панченко, Пат. РФ №2317076 С1; Бюл. Зобр. 2008 № 5]. З'єднання 2 і 4 можуть бути отримані окисленням відповідно сполук 3 і 1 різними органічними надкислотами за раніше запропонованою методикою відповідно до схеми:

Дослідження біологічної активності сполук 1 -4 , проведені щодо вірусу грипу, показали їхню високу ефективність як інгібіторів репродукції цього вірусу. В результаті досліджень виявлено, що з'єднання 1 і 2 більш активно впливають на репродукцію вірусу грипу, що підтверджується наведеними нижче даними. Зауважимо, що з модифікаціях ізомерів усниновой кислоти відбувається звернення біологічної активності. (R)-Уснінова кислота 1 виявляє більшу противірусну активність, ніж її (S)-енантіомер 3 , тоді як із пари енантіомерних похідних 2 і 4 істотно більшу активність має (S)-енантіомер - з'єднання 2 .

Отримані кількісні показники інгібування підтверджують високий рівень придушення реплікації вірусу грипу в культурі клітин MDCK сполуками 1 і 2 , що перевищує, наприклад, той самий показник у зразка порівняння - рибавірину в 2-3 рази.

Винахід ілюструється наведеними нижче прикладами.

Синтез (1аR,4аS,4bS,9аS)-1а,6-діацетил-4,4а,7-тригідрокси-3,4b-диметил-1аН-бензо[b]оксиренобензофуран-2,5(4аН,4bН)-діону 2

До розчину з'єднання 3 2 із виходом 41%.

(1аR,4аS,4bS,9аS)-1а,6-діацетил-4,4а,7-тригідрокси-3,4b-диметил-1аН-бензо[b]оксиренобензофуран-2,5(4аН,4bН)-діон 2. т.пл. 145°С (із СНСl 3). D +36,8 ° (з 0.199; СНСl 3). ЯМР 1 Н (СDСl 3 м.д.): 1.47 (3Н, с, Н-13), 1.78 (3Н, с, Н-12), 2.40 (3Н, с, Н-11), 2.63 (3Н, с, Н-15), 3.51 (1Н, с, ОН-4а), 5.85 (1Н, с, Н-8), 11.28 (1Н, с, ОН-4), 18.81 (1Н, с, ОН-7) . ЯМР 13 С (СDСl 3 , м.д.): 7.70 (С-12), 24.22 (С-13), 27.95 (С-15), 28.49 (C-11), 59.88 (C-4b), 65.67 ( C-1a), 75.49 (C-4a), 95.26 (C-9a), 99.21 (C-8), 106.53 (C-6), 114.95 (C-3), 162.09 (C-4), 173.97 (C -8a), 185.81 (C-2), 191.53 (C-7), 194.46 (C-5), 198.00 (C-10), 202.15 (C-14). ІЧ-спектр (KBr, см -1): 841, 1115, 1123, 1465, 1646, 1688, 1719, 2708, 3311. Мас-спектр, m/z (I відн, %): 376.1 (M + 3 182.1 (43.78), 167.1 (100.00), 43.0 (48.46).

Синтез (1аS,4аR,4bR,9аR)-1а,6-діацетил-4,4а,7-тригідрокси-3,4b-диметил-1аН-бензо[b]оксиренобензофуран-2,5(4аН,4bН)-діону4.

До розчину з'єднання 1 (1 ммоль) в 5 мл додають 3 мл розчину надоцтової кислоти (1 ммоль/мл) у хлороформі і залишають при перемішуванні та кімнатній температурі на добу. Після доби реакційну суміш промивають водою, сушать над MgSO 4 видаляють розчинник і хроматографують на колонці з силікагелем, елюенти - хлороформ. Виділяють з'єднання 4 із виходом 41%.

(1аS,4аR,4bR,9аR)-1а,6-діацетил-4,4а,7-тригідрокси-3,4b-диметил-1аН-бензо[b]оксиренобензофуран-2,5(4аН,4bН)-діон 4. Спектральні дані ті ж, що і для з'єднання 2 D -36,2° (з 0.199; СНСl 3).

Вивчення токсичності препаратів

Токсичність продуктів була попередньо вивчена щодо клітин MDCK. Клітини MDCK сіяли в 96-лункові планшети і культивували при 37°С в середовищі MEM з додаванням 10% сироватки великої рогатої худоби в атмосфері 5% 2 (у газопроточному інкубаторі Sanyo-175) до стану моношару. З досліджуваних препаратів готували матковий розчин концентрації 10 мг/мл у диметилсульфоксиді, після чого готували серію дворазових розведень препаратів серед MEM від 1000 до 3,75 µg/ml. Розчинені препарати вносили в лунки планшетів та інкубували 2 доби при 37°С. Після цього терміну клітини промивали 2 рази по 5 хвилин фосфатно-сольовим буфером, і кількість живих клітин оцінювали за допомогою мікротетразолієвого тесту (МТТ). З цією метою до лунок планшетів додавали по 100 мкл розчину (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтіазоліл-2) 2,5-дифенілтетразолію броміду (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на фізіологічному розчині. Клітини інкубували при 37°С в атмосфері 5% 2 протягом 2 годин і промивали 5 хвилин фосфатно-сольовим буфером. Осад розчиняли 100 мкл на лунку ДМСО, після чого оптичну щільність в лунках планшетів вимірювали на багатофункціональному рідері Victor 1420 (Perkin Elmer, Finland) при довжині хвилі 535 нм. За результатами тесту кожного продукту визначали 50% цитотоксичну дозу (CTD 50), тобто. концентрацію препарату, що викликає загибель 50% клітин у культурі.

Противірусна активність препаратів

Визначення противірусної активності препаратів проводили на клітинах MDCK у 96-лункових планшетах для клітинних культур. З'єднання розчиняли в підтримуючому середовищі клітин, вносили в лунки панелей з клітинним моношаром і інкубували протягом 1 години при 36°С в атмосфері 5% 2 .

З вірусом рідини (штам A/California/07/09 (H1N1)v) готували серію десятикратних розведень від 10 -1 до 10 -7 , додавали в лунки з препаратами і інкубували при 36°С протягом 48 годин в атмосфері 5% СО 2 . Після закінчення терміну інкубації аліквоту культуральної рідини змішували з рівним обсягом 1% курячих еритроцитів в окремих планшетах із круглим дном. Облік результатів проводили за 60 хвилин інкубації при 20°С. За титр вірусу в контролі та досвіді приймали величину, обернену до десяткового логарифму найбільшого розведення вихідного вірусу, здатного викликати позитивну реакцію гемаглютинації в лунці і виражали в кількості 50% інфекційних доз (ID 50). Вірусингибуючу дію досліджуваних сполук оцінювали зниження титру вірусу в досвіді порівняно з контролем. З отриманих даних розраховували 50% інгібуючу дозу ED 50 , тобто. концентрацію препарату, що знижує рівень вірусної реплікації вдвічі (на 0,3 lg ID 50), і індекс селективності, або хіміотерапевтичний індекс (SI), що є відношенням CTD 50 до ED 50 .

Таким чином, з'єднання 1 і 2 мають високу біологічну активність, яка проявляється в тому, що вони ефективно пригнічують реплікацію вірусу грипу в клітинах, і можуть використовуватися в чистому вигляді або як основа для нових високоефективних лікарських форм для лікування грипу.

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

Застосування (R-) - уснінової кислоти формули 1:

та окисленого похідного (S)-уснінової кислоти формули 2:

як інгібітори репродукції вірусу грипу (штам A/California/07/09 (H1N1)v).